《南昌大学》 2019年
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Twist1抑制人皮肤成纤维细胞的复制性衰老

王淑华  
【摘要】:目的:探讨Twist1对人皮肤成纤维细胞复制性衰老的影响及其可能机制。方法:1、组织块贴壁法提取人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts,HSF),通过连续传代建立5个HSF的复制性衰老模型。将传代的HSF分为年轻组(P3-7)、衰老组(P20-25),通过β-半乳糖核苷酶染色法比较细胞衰老染色率、5-乙炔基-2,脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2,deoxyuridine,Ed U)检测细胞增殖率的变化以及蛋白免疫印迹(Western-Blot)检测衰老相关蛋白p21表达的差异来验证复制性衰老模型是否成功建立。2、通过Western-Blot检测Twist1分别在年轻组与衰老组的表达情况。3、在年轻组中,通过分别转染Si-Twist1(Si-Twist1组)及其阴性序列(NC组),Western-Blot检测Twist1在Si-Twist1组中是否表达下调。并检测β-半乳糖核苷酶染色率、细胞增殖率及p21蛋白在Si-Twist1组与NC组之间的表达差异。结果:1、相比于年轻组,衰老组HSF的β-半乳糖衰老染色率明显增加,细胞增殖率明显下降,衰老相关蛋白p21的表达明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。这表明已成功建立了HSF的复制性衰老模型。2、Western-Blot检测发现Twist1蛋白在年轻组HSF中的表达水平显著高于衰老组(P0.05)。3、相比于NC组,Si-Twist1组的β-半乳糖核苷酶染色率升高、细胞增殖率下降及p21蛋白的表达升高(P0.05)。结论:Twist1在HSF的衰老过程中起重要作用,Twist1在衰老组HSF中表达明显下调。在体外抑制Twist1的表达可引起HSF的复制性衰老,这为探讨Twist1与HSF衰老的相关研究提供了依据。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R339.38

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